地表水、地下水以及污水中的聯苯胺檢測多采用高效液相色譜法其原理是水樣通過陽離子交換固相萃取柱時,聯苯胺就會被吸附,這時可以用乙酸溶液將聯苯胺鎖定在固相萃取柱上,然后再用甲醇淋洗除去雜質,接著用氨水甲醇溶液進行洗脫,洗脫液濃縮定容后,用具有熒光檢測器的高效液相色譜分離檢測。根據保留時間定性,外標法定量。

檢測所用試劑及儀器

實驗試劑

1.鹽酸:1.19g/mlo

2.冰醋酸:1.05g/ml。

3.氨水:0.91g/ml，優級純。

4.氫氧化鈉。

5.硫代硫酸鈉。

6.乙酸銨:色譜純。

7.聯苯胺:99.6%。

8.甲醇:液相色譜純。

9.乙醇。

10.乙腈:液相色譜純。

11.鹽酸溶液:1+1。

12.甲醇水溶液:1+1。

13.乙酸銨溶液:0.01mol/L。

  稱取0.77g乙酸銨，用水溶解后，稀釋定容至1L。

14.乙酸溶液:3+97。

  量取3ml冰醋酸和97ml水，混勻后備用。

15.氫氧化鈉溶液:1mol/L。

  稱取4g氫氧化鈉，用水溶解后，稀釋至100ml。

16.氨水甲醇溶液:5+95。

  量取5ml氨水和95ml甲醇,混勻后備用。

17.聯苯胺標準貯備液:1000ug/ml。

  稱取0.050g（精確到0.1mg）聯苯胺于50ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋定容至標線，轉移至內襯聚四氟乙烯墊的螺口棕色試劑瓶中保存。此溶液在4°C以下冷藏、避光可保存1年。也可直接購買市售有證標準溶液。

18.聯苯胺標準中間液:100ug/ml。

  準確移取1.00ml聯苯胺標準貯備液于10ml棕色容量瓶中，用甲醇稀釋定容至標線。此溶液在4C以下冷藏、避光可保存1年。

19.聯苯胺標準使用液I:10.0ug/ml。

  準確移取1.00ml聯苯胺標準中間液于10ml棕色容量瓶中，用甲醇水溶液稀釋定容至標線。此溶液在4C以下冷藏、避光可保存3個月。使用前，應放至室溫并混勻。

20.聯苯胺標準使用液II:1.00ug/ml。

  準確移取1.00ml聯苯胺標準使用液I于10ml棕色容量瓶中，用甲醇水溶液稀釋定容至標線。臨用現配。

21.固相萃取柱:混合型陽離子交換固相萃取柱，填料為苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯樹脂，150mg/6ml，或其他等效萃取柱。

22.濾膜:0.45pm聚四氟乙烯濾膜。

23.氮氣:純度≥99.99%。

檢測儀器設備

1.高效液相色譜儀:具熒光檢測器。

2.色譜柱:填料粒徑為5pm，柱長15cm，內徑4.6mm的C18反相色譜柱，或其他等效色譜柱。

3.樣品瓶:500ml具磨口塞的棕色細口玻璃瓶或帶聚四氟乙烯襯墊的棕色螺紋口玻璃瓶。

4.微量注射器:10ul、50ul和100ul。

5.氮吹儀。

6.超聲波清洗儀:輸出功率在180W以上，工作頻率為40kHz。

7.固相萃取裝置。

檢測水樣采集

  采樣前向樣品瓶中加入硫代硫酸鈉，每500ml樣品加入40mg。采樣時，應使樣品充滿采樣瓶，不留液上空間。如果樣品的pH不在6-9之間，用鹽酸溶液或氫氧化鈉溶液調節pH至6-9。采集的樣品應在4℃以下冷藏、避光保存，5d內萃取。萃取后的洗脫液在4℃以下冷藏、避光保存，4d內分析完畢。

水樣的制備

1.固相萃取柱的活化

  將固相萃取柱固定在固相萃取裝置上，先用5ml甲醇以約2ml/min的流速通過固相萃取柱，在填料暴露于空氣之前，向柱上加5ml水，待水剩約2ml時，停止活化。

2.富集、凈化與濃縮

  量取150ml水樣置于250ml錐形瓶中，以約2ml/min的流速通過活化后的固相萃取柱，水樣完全富集后，加入5ml乙酸溶液，待乙酸溶液完全流出后，加入8ml甲醇淋洗，待甲醇完全流出后，繼續用真空泵抽吸5min。用7ml氨水甲醇溶液洗脫，洗脫液收集到濃縮瓶中。然后將濃縮瓶置于氮吹儀上，在60℃濃縮至1ml，再用水定容至2.0ml，混勻后經濾膜過濾到棕色水樣瓶中，待測。

3.空白試樣的制備

  用實驗用水代替水樣，按照與試樣的制備相同步驟進行空白試樣的制備。

具體檢測步驟

1.色譜參考條件

  流動相A：乙腈，流動相B：乙酸銨溶液；洗脫程序為等度洗脫，流動相A/流動相B=20/80（V/V），流速：1.0ml/min；柱溫：40℃；激發波長：292nm，檢測波長：395nm；進樣體積：40.0ul。

2.建立校準曲線

  分別取適量的聯苯胺標準使用液Ⅰ或聯苯胺標準使用液Ⅱ，用甲醇水溶液稀釋，制備至少5個濃度點的標準系列，聯苯胺的質量濃度分別為2.00ug/L、5.00ug/L、10.0ug/L、50.0ug/L、100ug/L、200ug/L（此為參考濃度）。按照色譜參考條件，由低濃度到高濃度依次對標準系列溶液進樣，以聯苯胺的質量濃度（ug/L）為橫坐標，對應的色譜峰面積或峰高為縱坐標，建立校準曲線。

3.水樣的測定

  被檢測水樣及空白試樣可以按照與校準曲線的建立相同的條件進行試樣的測定。

  最后定性分析也可根據水樣中聯苯胺化合物與標準系列中目標化合物的保留時間進行定性，可采用不同波長下的熒光強度比輔助定性，必要時用高效液相色譜-三重四極桿質譜法進行確認。而定量分析可以按照相關的公式進行計算。

以上內容來源于《HJ 1017-2019 水質 聯苯胺的測定 高效液相色譜法》

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